酶标仪已经逐渐成为了实验室里的常规仪器,普通酶标仪的价格并不算高,不过若是没选对合用的型号也相当令人头疼。购买仪器往往比选试剂麻烦得多,各种各样的参数难免让人挑花了眼,怎样才能找到最经济适用的酶标仪呢?
酶标仪一般分为普通酶标仪和多功能酶标仪,普通酶标仪的功能基本相当于一个分光光度计,主要用于吸收光(OD值)检测,我们一般用普通酶标仪进行蛋白/核酸定量、Elisa、MTT等常规实验。而多功能酶标仪在此基础上还可以进行发光检测和荧光检测,能够直观反映出目标分子在细胞内的活性。多功能酶标仪应用相当广泛,包括:报告基因研究、分子间相互作用、信号传导、药物代谢和药物筛选等等。
滤光片vs光栅
在选购酶标仪的时候,我们会首先面临一个选择,滤光片还是光栅?酶标仪主要分为滤光片型和光栅型,分别以两种不同方式生成特定波长的激发光,一种是通过滤光片,一种是通过单色器(包括光栅和棱镜)。对于我们使用者来说,这两种酶标仪究竟有何区别呢?
滤光片透光度高,光路简单,能够最大程度减少光线的损失,因此滤光片型酶标仪一般要比光栅型酶标仪灵敏。此外,滤光片能够实现快速的波长转换,很适合离子通道比率分析以及双信号快速动力学分析等。滤光片的配置决定了酶标仪所能使用的波长,我们更改实验波长就是在切换滤光片。滤光片型酶标仪一般要比光栅型便宜一些,如果我们需要的波长比较固定,对灵敏度又有较高要求,那么滤光片型酶标仪无疑是最佳选择。若是日后想要应用其他波长,还需另外购买滤光片,要是需添置的波长多就不大合算了。所以在我们出手之前一定要先想好未来可能进行的各项研究,谋定而后动。
目前市面上的光栅型酶标仪其实比滤光片型更为普遍,这是因为光栅可以灵活设置波长,就算临时开展新研究也不用专门去买滤光片。而且如果我们要用未知染料进行检测,或是需要自定义波长和光谱扫描,就只能选光栅型酶标仪。此外,光栅在近紫外区的检测效率也更高(如色氨酸荧光检测)。最先推出光栅型酶标仪的是MD公司(Molecular Devices),MD酶标仪采用一个光栅和一个滤片滤光的单光栅系统。后来又出现了两个光栅组成的滤光系统,例如PE、TECAN、Thermo、BioTek等公司的一些产品,这类系统由于激发和发射各用两个光栅也被称为四光栅系统。
总的来说,如果实验室应用很多需要多种波长,那么选择灵活方便的光栅型酶标仪准没错。若是应用比较单一但对灵敏度要求高,物美价廉的滤光片型酶标仪就相当贴心。此外,还有BioTek公司的Hybrid Technology系统,该系统将滤光片和单色器组合起来,想用滤光片时选滤光片,想用光栅时选光栅,就是这么简单。
适合的才是最好的
不论我们买什么,适合自己的才是最好的,选择酶标仪时也是如此。酶标仪性能指标包括测定波长范围、滤光片配置、检测速度、吸光度范围、线性范围、分辨率、准确度、精密度等。
对于一般生命科学实验室来说,酶标仪主要可用于基因表达、信号传导、ELISA、蛋白和核酸定量、细胞活性分析和免疫分析。如果要进行细胞学实验,酶标仪一般要能够底部读取、微孔板扫描、并支持孵育和摇晃。而要做高通量筛选的实验室,就需要考虑到检测速度和灵敏度。高通量筛选可能涉及到特殊筛选溶液、更低的检测限以及大量微孔板。在选择酶标仪时除了要关注可靠性、灵敏度和一致性以外,能否对微孔板所有孔进行同时检测也是不可忽视的考量因素。
应用保障:认证
面对不同品牌型号众多的酶标仪,要怎样客观评估它们的性能呢?一些权威机构和大型企业为酶标仪检测性能提供了第三方认证。这些认证主要表明酶标仪能否适用于一些高要求试剂盒,涵盖了酶标仪的各项性能,包括检测方法、灵敏度、线性范围、孔间干扰等。
下表为列出了一些相关应用的权威认证,你可以根据自己的应用按图索骥:
实验应用
| 相关认证
|
荧光检测
| Invitrogen公司LanthaScreen系列认证
涵盖FI、FRET、TRF、FP等多个子项目
可在Invitrogen官网核对
|
发光检测(Luciferase)
| Promega公司DLReady认证
|
TR-FRET
| Cisbio公司HTRF认证
|
FP
| BellBrook实验室Transcreener认证
|
任何仪器在使用过程中总会遇到些问题,用得久了更会涉及到维修。因此,售后服务是购买酶标仪时不能不考虑到的问题。购买仪器时一般都会在合同中列明维修条款,不过若是供应商在本地设有办事处,解决问题起来就更方便了。
日常保养很重要
酶标仪是一种精密的光学仪器,若是日常不注意保养而影响了仪器性能,很可能会在不知不觉中影响了实验结果。其实,酶标仪的日常保养并不复杂,养成好习惯就可以避免大问题。酶标仪附近最好保持干燥,样品溅出也需要及时清理,若潮湿导致电路进水就需要换配件,这样就太不值当了。仪器表面可用不太潮湿且干净无尘的布擦拭,蒸馏水、乙醇、0.5%次氯酸钠都可以用来清洁,但其他有机溶剂可不能乱用。此外,电脑和主机之间的数据线,要等彻底关机之后才能拔掉,不然可能损坏通讯网络,这样产生的维修费用可是很高的哦。
仪器使用小tips
不论仪器售后有多好,也很难做到工程师随叫随到,因为工程师们往往是公司中最忙碌的人。要是酶标仪报错无法使用,而我们的实验又等不了怎么办?据资深工程师介绍,其实他遇到的大多数维修问题都是很简单的,用户通过电话咨询就可以自行解决。以下就是一些酶标仪报错的常见情形,这些实用小tips一定可以帮你成为动手达人,一解实验室的燃眉之急。
情景一:阳光明媚的中午,放在窗边的酶标仪报错,自检也无法运行。别紧张,先给它另外腾一个阴凉地再试一下。酶标仪是一种精密的光学仪器,强光自然会有巨大影响,所以是不能放在窗边的。
情景二:实验室迎来繁忙的一天,落地式离心机忙个不停,旁边的酶标仪又报错,真头疼。别担心,仪器多半不是大毛病,只不过被大型离心机影响了。大功率设备产生的磁场会干扰其他电器,此外振荡也会影响酶标仪微孔板中的液面高度,导致检测结果不准确。赶紧挪地方吧,别再和离心机、摇床、混匀器或其他大功率设备掺和到一起了。
情形三:又是一年梅雨季,一阵子没用酶标仪,怎么有些波长就用不了了?潮湿是酶标仪的大敌,不仅可能让滤光片受潮,还会损害电路。这时把滤光片拆下来对着太阳一看,往往会看到一层霉,只要好好清理就能正常使用。在清理时我们一般是用擦镜纸向一个方向擦拭,不过对付普通灰尘其实可以用洗耳球吹,多简单。至于顽固污渍,可以用无水乙醇擦拭,然后自然晾干或40℃低温烘干,高温乃是大忌。
来源:生物通