【原理】
Hoechst 33258为特异性DNA染料，与A-T键结合，这种染料对死细胞或经70%冷乙醇固定的细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在10min内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
【试剂与器材】
1. Hoechst 33258贮存液： 称取Hoechst 33258试剂1mg，用20ml蒸馏水溶解后，滤过，4℃ 避光保存。用时蒸馏水10倍稀释成染色液。
2.封片液（pH5.5）：20mmol/L柠檬酸；50mmol/L磷酸氢二钠；50%甘油， 长春新碱
3.细胞固定液 甲醇、冰乙醇（3∶1），现配。
【操作步骤】
1.将细胞以4 .0×10 8 /L密度接种于用12孔培养板中，每孔3 mL，37℃ 、5%CO 2孵箱中培养 至细胞贴壁，加入长春新碱，使之终浓度分别为0、10、100μg /mL。继续培养过夜。细胞学涂片或细胞甩片机制备的单细胞片
2.细胞固定液4℃ 固定5min
3.蒸馏水清洗后，点加Hoechst 33258染色液，10min
4.蒸馏水洗片后，用滤纸沾去多余液体
5.封片剂封片后将荧光显微镜下观察并拍照。
